Описание
F полимераза представляет собой высокоочищенный рекомбинантный термостабильный фермент с повышенной процессивностью и точностью, без горячего старта.
F полимераза хорошо подходит для проведения высокоточной амплификации ДНК с высоким выходом продукта. Рекомендуется для различных генно-инженерных работ, в том числе мутагенеза, клонирования, создания геномных библиотек и других применений. Длина амплифицированного фрагмента зависит от природы и качества ДНК-матрицы, и при оптимальных условиях может достигать 10 тысяч п.о.
Области применения:
- Высокоточная ПЦР;
- ПЦР длинных фрагментов (>10 т.п.о.);
- «Direct-ПЦР» с использованием в качестве матрицы ЭДТА-стабилизированной крови (до 15%)
Состав
- F полимераза (2 е.а./мкл),1 пробирка 250 мкл;
-
5x буфер HF мастер-микс, 4 пробирки по 1500 мкл;
-
ДМСО, 1 пробирка 500 мкл
Характеристики фермента:
- имеет 5′→3′ полимеразную активность;
- имеет 3′→5′ корректирующую экзонуклеазную активность (в 50 раз точнее Taq полимеразы);
- в 10 раз превышает скорость работы Pfu полимеразы, со снижением времени элонгации до 15-30 с/1 т.п.о.;
- устойчив к ингибиторам ПЦР (успешно амплифицирует матрицу в присутствии 15% цельной крови, стабилизированной в ЭДТА);
- не имеет горячего старта;
- не имеет 5′→3′ экзонуклеазной активности;
- не имеет трансферазной активности (позволяет получать фрагменты ДНК с «тупыми» концами)
Описание ПЦР-буфера:
5x буфер HF мастер-микс содержит 10мМ MgCl
2 и dNTP (dATP, dCTP, dGTP, dTTP по 0,5 мM каждого).
Единица активности:
За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для перевода 10 нмоль dNTP в кислотно-нерастворимую фракцию за 30 минут при + 74°С.
