Протеиназа К, 10мг

Описание

Протеиназа К - сериновая протеаза, обладающая широким спектром специфичности.

Наиболее активно гидролизует пептидную связь прилежащую к карбоксильной группе алифатических и ароматических аминокислот.

Используется для гидролиза белковых примесей различной природы и инактивации нуклеаз в препаратах НК, а также для повышения эффективности лизиса тканей и клеток в процедурах экстракции НК. 

Характеристики:

• молекулярная масса 18,5 kDa;
• максимальная активность при рН 8,0;
• рабочая концентрация фермента 20-200 мкг/мл
• проявляет активность в растворах с большим диапазоном значений pH (4.3-12.5), и в широком диапазоне температур – 20-65°C;
• способна сохранять активность в присутствии ЭДТА (0.5 M), GuHCl (3 M), мочевины (4 M), Tween 20 (5%), Triton X-100 (1%), SDS (0,5%);
• ионы кальция стабилизируют фермент, однако в отсутствие ионов Ca²⁺  фермент проявляет около 20% исходной активности, как правило, этого достаточно для деградации белков, обычно присутствующих в препаратах НК;
• ингибируется фенилметилсульфонилфлюоридом (PMSF), диизопропилфосфорофлюоридат (DFP), EGTA

Поставляется в лиофилизированном виде вместе с буфером для разведения.

Пример проведения реакции

1. Денатурация белка. Обработайте образец в 6М GuHCl или в 6М мочевине, 50mM TrisHCl, pH 8,0, 2-5 mM DTT при 60°С 45-60 мин. Охладите образец, а затем разведите его на буфере 50 mM Tris-HCl (pH 7.5); 5 mM CaCl₂ до концентрации GuHCl или мочевины  2М и меньше.

2. Обработка протеиназой К. Добавьте протеиназы К до конечной концентрации 50-100 мкг/мл. Инкубируйте при 37-56°С не менее часа. Инактивируйте фермент при 75°С в течение 10-15 мин.

Отдельно можно приобрести СПК-буфер - буфер для предобработки сухих пятен крови.

Характеристики